如何提高细胞存活率

提高细胞存活率的关键措施

一、优化培养环境 

- 培养基选择：使用无血清或化学成分限定培养基，避免批次差异。添加必需生长因子（如bFGF、EGF）和1%非必需氨基酸。 

- 理化参数控制：维持温度37±0.2℃（哺乳动物细胞），pH 7.2-7.4（CO₂调节），溶氧30-60%（根据细胞类型调整）。 

二、减少机械损伤 

- 低剪切力培养：搅拌式反应器转速≤60 rpm（动物细胞），气升式反应器用于敏感细胞。 

- 温和传代：用低浓度胰酶（0.05% Trypsin-EDTA）消化，加入含血清培养基终止反应。 

三、代谢废物管理 

- 动态补料：流加葡萄糖（维持2-4 mM）和谷氨酰胺，避免乳酸>4 mM和氨离子>2 mM积累。 

- 灌流培养：中空纤维系统每日置换50%培养基，及时清除代谢废物。 

四、冻存与复苏保护 

- 程序冻存：使用含10% DMSO的冻存液，以1℃/分钟降温至-80℃后转入液氮。 

- 快速复苏：37℃水浴中1分钟内融化，离心去除冻存液后立即接种。 

五、污染防控 

- 严格无菌操作：超净台紫外线消毒30分钟，所有耗材高压灭菌。 

- 定期检测：每周PCR检测支原体，培养基抽样做无菌试验。 

六、数据监测 

- 每日检测：台盼蓝染色评估活率（目标>95%），检测葡萄糖/乳酸水平。 

- 设备校准：每月校验培养箱温度、CO₂浓度和生物反应器pH/DO探头。