细胞培养污染控制方案

一、污染类型 

主要污染包括微生物（细菌、真菌、支原体）、化学物（内毒素、重金属）和交叉污染。

细菌污染24小时内可见培养基浑浊，真菌污染呈现菌丝结构，支原体需PCR检测，化学污染常导致细胞生长异常。 

二、预防措施 

环境控制：操作区需达到ISO 5级洁净标准，定期紫外线消毒

人员操作：穿戴无菌防护装备，操作前用75%乙醇消毒台面和手套

耗材管理：培养基需0.22 μm过滤，玻璃器皿180℃干热灭菌2小时，塑料耗材采用γ射线辐照灭菌。 

三、污染监测 

每日观察培养基颜色和透明度

定期镜检细胞形态

每周用MycoAlert™检测支原体

每月进行内毒素检测（限值<0.1 EU/mL）

关键设备（如生物安全柜）需每季度沉降菌检测。 

四、污染处理 

发现污染立即隔离培养物，细菌/真菌污染用5%次氯酸钠浸泡后高压灭菌（121℃, 30分钟）

支原体污染可尝试BM-Cyclin处理（5 μg/mL, 14天），严重污染需

废弃细胞系并全面消毒培养箱。 

五、系统维护 

生物反应器每次使用后执行CIP（1M NaOH循环30分钟），培养箱每月用2%过氧化氢熏蒸。水浴锅定期更换消毒剂，CO₂培养箱托盘添加硫酸铜抑制霉菌。 

六、关键点： 

- 严格分区操作（细胞处理与试剂准备区分开） 

- 所有进培养箱物品需乙醇喷洒消毒 

- 保留10%未处理细胞冻存作为备份